產(chǎn)品類別：腫瘤細胞的分離
 
產(chǎn)品編號：LP2014RAT
 
產(chǎn)品名稱：大鼠腫瘤組織淋巴、單核巨噬、粒細胞分離液試劑盒
 
產(chǎn)品規(guī)格：3X200ml/Kit
 
產(chǎn)品價格：￥1200元

 
“XXXX”動物腫瘤組織淋巴細胞、單核巨噬、粒細胞
 
分離液實驗方法
 
技術(shù)文檔編號：TBD0052SOP
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
3×200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
 

	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格
A	分離液 1		200ml
B	分離液 2		200ml
C	分離液 3		200ml
D	試劑 F（贈品）	F2013TBD	200ml
E	樣本稀釋液（贈品）	2010C1119	200ml
F	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml
G	說明書		1 份

 
【實驗前準備】
 
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
 

• 首先制備組織單細胞懸液，制備方法詳見“組織單細胞懸液制備技術(shù)”。取一支適當?shù)碾x心管，依次小心加入分離液 1、分離液 2、分離液 3（體積比為 3:2:1，體積總量與組織單細胞懸液體積相等），制成梯度界面，各液面分層一定要清晰。（如組織單細胞懸液樣本量為 6ml，則加入分離液 1：3ml、分離液 2：2ml、分離液 3：1ml。）

 

• 用吸管小心吸取組織懸液樣本加于分離液液面上，400-500g，離心 20-30min（注：根據(jù)組織懸液樣本量確定離心條件，樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，最大離心力可達 1200g，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果）。
• 離心后，此時離心管中將出現(xiàn)兩層環(huán)狀乳白色細胞層。

 

• 用吸管吸取兩層環(huán)狀目的細胞層（如有紅細胞混雜則需用紅細胞裂解液（需另購）裂解

 
紅細胞，具體操作說明詳見“紅細胞裂解液使用說明”）到 15ml 離心管中，往所得離心
 

管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細胞。
 

• 250g，離心 10min。

 

• 棄上清。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 重復(fù) 6、7、8，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞。

 
【注意事項】
 

• 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結(jié)果，最好在取樣 2h 內(nèi)進行實驗，樣品存放時間越長，細胞分離效果越差。樣品放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。

 

• 本實驗最好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導(dǎo)致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。

 

• 如所實驗后細胞得率或活性過低，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助。

 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
 
封后置常溫保存。
 
【參考值（參考范圍）】
 
本實驗?zāi)[瘤組織淋巴細胞、單核巨噬、粒細胞提取率大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例，用戶可適當進行參考。
 

	紅細胞		白細胞		血小板
		（4.0-10.0）×109
含量（個/L）	（4.0-5.5）×1012	中性粒細胞	淋巴細胞	單核細胞	（1.0-3.0）×1011
		50%-70%	20%-40%	3%-8%
【相關(guān)實驗技術(shù)方案】

 

• 組織單細胞懸液制備技術(shù)。

 

• 所獲得腫瘤組織淋巴細胞、單核巨噬、粒細胞的培養(yǎng)技術(shù)。

 

• 所獲得腫瘤組織淋巴細胞、單核巨噬、粒細胞的核酸提取技術(shù)。

 

• 所獲得腫瘤組織淋巴細胞、單核巨噬、粒細胞的鑒定方法