豬腸粘膜組織淋巴細胞分離液實驗方法
 
本品用于分離豬腸粘膜組織淋巴細胞
技術文檔編號：TBD0018SOP
 
【產品規格】
 
200ml/Kit
 
【產品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內容如下：
 

	名稱	產品編號	規格
A	XXXX 動物組織淋巴細胞分離液		200ml
B	樣本稀釋液（贈品）	2010C1119	200ml
C	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml
D	F 液（贈品）	F2013TBD	200ml
E	說明書		1 份

 
【實驗前準備】
 
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。
 

• 首先制備組織單細胞懸液，制備方法詳見“組織單細胞懸液制備技術”。

 

• 取一支 15ml 離心管，加入與組織單細胞懸液等量的分離液（注：分離液最少不得少于

 
3ml）。
 

• 用吸管小心吸取組織單細胞懸液加于分離液液面上，400-500g，離心 20-30min。（注：根據組織單細胞懸液量確定離心條件，組織單細胞懸液量越大，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果）。

 

• 離心后，此時離心管中由上至下分為四層。第一層為稀釋液層。第二層為環狀乳白色淋巴細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。

 

• 用吸管小心吸取第二層環狀乳白色淋巴細胞層到另一 15ml 離心管中，向離心管中加入 10ml 清洗液（產品編號：2010X1118），混勻細胞。
• 250g，離心 10min。

 

• 棄上清。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產品編號：2010X1118）重懸所得細胞。

 
 

• 250g，離心 10min。

 

• 重復 7、8、9，棄上清后以 0.5ml 后續實驗所需相應液體重懸細胞。

 
分離圖例
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【注意事項】
 

• 全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結果，最好在取樣 2h 內進行實驗，樣品存放時間越長，細胞分離效果越差。樣品放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。

 

• 本實驗最好不要使用高聚合材質（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無靜電、低靜電離心管及未經堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。

 

• 吸取過多的淋巴細胞層及分離液層會導致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數量增加。

 

• 分離液用量大于組織單細胞懸液樣本時，分離效果更佳。

 

• 如實驗后細胞得率或活性過低，請聯系研謹生物技術以尋求幫助。

 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現白色結晶，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】
 
本實驗淋巴細胞提取率及純度大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細胞的數量及比例，用戶可適當進行參考。